大肠杆菌TEM-1 β -内酰胺酶Asn276Asp变体的x射线结构:静电调制对克拉维酸失活抗性的直接观察。
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Swaren P, Golemi D, Cabantous S, Bulychev A, Maveyraud L, Mobashery S, Samama JP
大肠杆菌TEM-1 β -内酰胺酶Asn276Asp变体的x射线结构:静电调制对克拉维酸失活抗性的直接观察。
生物化学。1999 7月27;38(30):9570-6。
- PubMed ID
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10423234 (PubMed视图]
- 摘要
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β -内酰胺类抗生素与β -内酰胺酶灭活剂(如克拉维酸)联合使用的临床应用导致了对这些分子灭活不敏感的β -内酰胺酶的选择。因此，酶灭活剂和青霉素的治疗组合对含有这种酶的细菌是无害的。TEM -内酰胺酶变体是这类酶中最常见的，目前有20种变体被指定为抗抑制性TEM(“IRT”)酶。三种突变似乎解释了大多数IRT酶的表型，其中之一是Asn276Asp取代。在本研究中，我们描述了野生型TEM-1 β -内酰胺酶及其Asn276Asp变体与三种临床使用的灭活剂克拉维酸(克拉维酸)、舒巴坦和他唑巴坦的抑制过程的动力学特性，并报告了突变变体在2.3 A分辨率下的x射线结构。抑制剂与野生型酶和突变型酶相互作用的动力学参数变化对克拉维酸酶更为明显，而舒巴坦和他唑巴坦则相对不显著。Asn276Asp突变酶的结构揭示了Asp276的显著移动，其侧链与抑制剂羧酸盐的反离子Arg244的胍基形成了盐桥。在野生型酶结构中观察到的对克拉维酸盐失活化学至关重要的水分子，在突变型的晶体结构中不存在。这种结构变化有利于翻转过程，而不是克拉维酸的失活化学，具有深刻的表型后果。本报告是抗抑制剂-内酰胺酶研究的最佳实例。