牛脑脯氨酸后裂解酶(脯氨酸内肽酶)。

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吉本T，西村T，喜多T，鹤D

牛脑脯氨酸后裂解酶(脯氨酸内肽酶)。

生物化学杂志，1983年10月;94(4):1179-90。

PubMed ID

6361010 (PubMed视图

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摘要

通过DEAE-Sephadex、羟基磷灰石和PCMB-T-Sepharose柱层析，以n - carbobenzoxyy - gly -pro - β -萘酰胺(Z-Gly-Pro-2-NNap)、促甲状腺激素释放激素(TRH)和催产素为底物，在Sephadex G-200上凝胶过滤，从牛脑提取物中纯化出脯氨酸后裂解酶[脯氨酸内肽酶，EC 3.4.21.26]，纯度约3700倍。经圆盘凝胶电泳和SDS凝胶电泳检测，纯化的酶均质。该酶在pH值7.5和7.2时对Z-Gly-Pro-2-NNap和TRH最活跃，水解的肽键包括合成底物的Pro-X (X=氨基酸、肽、酯和酰胺)键、催产素、抗利尿激素、神经紧张素、P物质、tuftsin、缓激肽和胰岛素B链。然而，这种酶对胶原蛋白、明胶和酪蛋白是惰性的。二异丙基氟化磷(DFP)、z - gly -原氯甲基酮和对氯苯甲酯(PCMB)均能使酶完全失活，而苯基甲烷磺酰氟(PMSF)和金属螯合剂均不抑制酶活性。氨基酸组成测定显示该酶含有25个半胱氨酸。PCMB修饰酶的三个半胱氨酸残基导致酶完全失活。酶的等电点为4.8，超离心分析估计其分子量为76000，凝胶过滤和十二烷基硫酸钠(SDS)凝胶电泳估计其分子量为75000 ~ 74000，表明该酶以单体形式存在。这些结果表明，从牛脑中提取的脯氨酸后裂解酶在酶学性质、底物特异性和理化性质方面与之前从羊脑和肾中纯化的脯氨酸后裂解酶非常相似，这与Tate报道的牛脑脯氨酸内肽酶对催产素、抗利尿激素和缓激肽不活跃的结果形成了鲜明的对比。

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