基于噬菌体mu体外DNA转位反应的高效DNA测序策略。
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Haapa S, Suomalainen S, Eerikainen S, Airaksinen M, Paulin L, savilahhti H
基于噬菌体mu体外DNA转位反应的高效DNA测序策略。
Genome res 1999 march;9(3):308-15。
- PubMed ID
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10077537 (PubMed视图］
- 摘要
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在噬菌体Mu体外DNA转位反应的基础上，建立了一种高效的DNA测序策略。在该反应中，一个含有氯霉素乙酰转移酶(cat)基因的人工转座子作为可选择标记整合到含有10.3 kb小鼠基因组插入物的目标质粒DNA中进行测序。将转位反应产物转化到大肠杆菌细胞中，在合适的选择板上进行筛选，获得携带不同位置转座子插入的质粒的细菌克隆。从单个克隆中分离出来的质粒被用作DNA测序的模板，每个质粒都有两个针对转座子序列的特异性引物，但从相反的方向读取序列，从而创建了一个迷你测序。结合重叠minicontigs的信息，获得了小鼠基因组中包含6个Kcc2基因外显子的整个10288 bp区域的序列。结果表明，所述方法非常适合于需要大量序列信息的DNA测序项目。此外，大规模的DNA测序项目，包括全基因组测序项目，预计将从Mu战略中受益匪浅。