机制的不可逆失活老鼠alpha-difluoromethylornithine鸟氨酸脱羧酶。特征序列的抑制剂和辅酶结合位点。
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陆Poulin R, L,阿克曼B,省长P·佩吉AE
机制的不可逆失活老鼠alpha-difluoromethylornithine鸟氨酸脱羧酶。特征序列的抑制剂和辅酶结合位点。
J生物化学杂志。1992年1月5日,267 (1):150 - 8。
- PubMed ID
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1730582 (在PubMed]
- 文摘
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老鼠的鸟氨酸脱羧酶(ODC)在大肠杆菌表达,纯化重组酶用于测定吡哆醛结合位点的5 '磷酸和残留修改enzyme-activated不可逆失活的酶的抑制剂,alpha-difluoromethylornithine (DFMO)。吡哆醛的5 '磷酸绑定赖氨酸在鼠标ODC被确认为赖氨酸69鼠标序列通过减少净化全酶形式NaB [3 h] 4其次是消化的羧甲基化蛋白质endoproteinase Lys-C,放射性肽图使用反相高压液相色谱,气相肽测序。这PFYAVKC序列中含有赖氨酸,在所有已知的odc真核生物。前面的氨基酸不符合SXHK的共识序列,其中包含5 '磷酸吡哆醛绑定赖氨酸在许多其他脱羧酶包括odc的大肠杆菌。使用一个类似的过程来分析ODC标记通过与[5-14C] DFMO反应,发现赖氨酸69年和360年半胱氨酸形成共价抑制剂加合物。半胱氨酸360,这是主要的加合物占了大约90%的总标签,包含在序列-WGPTCDGL(我)D -,这是已知存在于所有真核odc。这些结果提供了强有力的证据表明这两种肽形式ODC的重要部分催化部位。bombardment-mass快原子光谱法分析的胰蛋白酶的肽包含DFMO-cysteine加合物表明,加合物形成的酶可能是环状亚胺S - (2 - (1-pyrroline)甲基)半胱氨酸。这是容易氧化S - ((2-pyrrole)甲基)半胱氨酸或转化为S - ((2-pyrrolidine)甲基)半胱氨酸NaBH4减少。这种加合物与光谱是一致的证据表明,失活的酶DFMO并不需要一个稳定的加合物的形成之间的吡哆醛5 '磷酸、酶和抑制剂。