人细胞色素P450 2C9的等位变异:杆状病毒介导的野生型和I359L突变型的表达、纯化、结构表征、底物立体选择性和前手性选择性

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海宁RL，亨特AP, Veronese ME, Trager WF, Rettie AE

人细胞色素P450 2C9的等位变异:杆状病毒介导的野生型和I359L突变型的表达、纯化、结构表征、底物立体选择性和前手性选择性

清华大学学报(自然科学版)。1996年9月15日;33(2):447-58。

PubMed ID
8809086 (PubMed视图
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摘要

本研究的目的是通过对药物的两种对映体进行体外动力学研究，确定CYP2C9的I359L等位变异在低治疗指数抗凝血药华法林代谢中的作用。为了获得足够数量的这些变体，以便在生理相关底物浓度下进行动力学研究，我们建立了使用杆状病毒系统对野生型CYP2C9和CYP2C9V1进行高水平表达、纯化和结构表征的方法。两种形式的全酶表达量均高达250 nmol/l，纯化率为50-55%，特异性含量为13-14 nmol/ mg蛋白。用Edman降解和电喷雾质谱对纯化的产物进行了表征。两种形式的酶代谢药理学上更有效的华法林(S)对映体具有相同的区域选择性;然而，与野生型酶相比，CYP2C9V1的Vmax低5倍，Km高5倍。两种酶都不能形成大量的(R)-华法林酚。对前手性芳基烷基硫化物进行的其他研究证实了CYP2C9V1催化的低周转率，并进一步证明亚砜产品的立体化学在两种变体之间没有显著差异。因此，催化效率的降低而不是底物取向的重大改变似乎是这种假定活性位点突变的结果。I359L变体的催化效率大大降低，这表明亮氨酸纯合子在体内会以比表达野生型酶的个体更慢的速度消除(S)华法林，可能还有许多其他CYP2C9底物。

引用本文的药物库数据

多肽
的名字 UniProt ID
细胞色素P450 2C9 P11712 细节
Pharmaco-genomics
药物 相互作用的基因/酶 等位基因的名字 基因型 定义变化(s) 类型(年代) 描述 细节
华法令阻凝剂 细胞色素P450 2C9
基因符号:CYP2C9
UniProt:P11712		 CYP2C9 * 3 不可用 效果推断出 药物代谢不良，剂量要求低 细节
Phenprocoumon 细胞色素P450 2C9
基因符号:CYP2C9
UniProt:P11712		 CYP2C9 * 3 不可用 美国存托凭证推断出 与延迟稳定有关。如果同时携带rs9934438基因，严重过度抗凝的风险增加。 细节