CYP102A1M11H作为反应性药物代谢产物蛋白加合物生成工具的应用
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Boerma JS, Vermeulen NP, Commandeur JN
CYP102A1M11H作为反应性药物代谢产物蛋白加合物生成工具的应用
化学研究毒物。2011年8月15日;24(8):1263-74。doi: 10.1021 / tx2001515。Epub 2011 6月16日。
- PubMed ID
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21639118 (PubMed视图］
- 摘要
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活性代谢产物(RMs)与蛋白质的共价结合被认为是药物引起组织损伤的重要机制之一。为了促进药物蛋白加合物的研究，我们开发了一种潜在的通用方法来生产高水平的共价修饰蛋白。一种代谢P450 BM3突变体的高活性药物(CYP102A1M11H)用于药物生物活化。由于CYP102A1M11H具有His-tag，镍亲和层析易于去除，便于后续修饰靶蛋白的表征。以人谷胱甘肽- s -转移酶P1-1 (hGST P1-1)为模型靶蛋白，通过捕获对乙酰氨基酚(APAP)、氯氮平(CLOZ)和曲格列酮(TGZ)的均数来证明了我们的程序的适用性。LC-MS/MS对hGST P1-1的Tryptic消化物进行分析，并通过比较加合和未加合hGST P1-1的Tryptic肽来鉴定修饰肽。药物修饰肽的特征MS/MS离子首先通过搜索预期的内加物质量进行鉴定。必威国际app随后，通过对修饰肽的诊断性MS/MS离子的筛选，以无偏倚的方式鉴定了未预料到的药物-肽加合物。APAP和CLOZ的活性中间体分别内合成半胱氨酸-47，质量位移对应于n -乙酰基-对苯醌亚胺(NAPQI)和CLOZ的氮离子烷基化。TGZ的加合更加复杂，产生了三种不同类型的半胱氨酸-47加合物，两种半胱氨酸-14加合物，以及一种半胱氨酸-101加合物。 Together, these findings show that P450 BM3 mutants with high capacity to activate drugs into relevant RMs can be employed to produce protein adducts to study the nucleophilic selectivity of highly reactive electrophiles.