对催化机理的说明mono-ADP-ribosyltransferase活动的绿脓杆菌外毒素A。
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阿姆斯特朗,美林的基于“增大化现实”技术
对催化机理的说明mono-ADP-ribosyltransferase活动的绿脓杆菌外毒素A。
生物化学。2004年1月13日,43 (1):183 - 94。doi: 10.1021 / bi034772u。
- PubMed ID
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14705944 (在PubMed]
- 文摘
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的催化机理mono-ADP-ribosyltransferase绿脓杆菌外毒素的活性由稳态和stopped-flow动力学分析研究。绑定的速率常数NAD(+)底物的酶被发现是4.7 + / - 0.4 microM(1)(1)和194 + / - 15 s (1) k(上)和k(关闭),分别。k(上)和k(关上)的速率常数eEF-2衬底结合酶320 + / - 39 microM(1)(1)和131 + / - 22(1),分别。一个强有力的竞争抑制剂对酶1,8-naphthalimide,绑定的酶与k(上)和k (82 + / - 9) microM(1)(1)和51 + / - 6 s(1),分别。此外,绑定了利率的反应产物,ADP-ribose和烟酰胺,过于快速stopped-flow的检测技术。调查的pre-steady-state动力学ADP-ribose转移酶的活性toxin-enzyme显示没有pre-steady-state复杂的催化循环中形成。绑定的NAD +和较小的化合物代表衬底进行调查的各个部分的荧光猝灭荧光内在毒素。绑定数据显示一个重要的结构性变化在酶在NAD +绑定不能占的基础上引发的结构性变化的总和各种NAD +成分。产物抑制烟碱和eEF-2-ADP-ribose进行了研究,结果表明,反应涉及到随机顺序三元复杂的机制。详细的动力学分析表明,eEF-2底物显示了s形与酶动力学行为,和荧光共振能量转移的测量表明,小麦胚芽eEF-2是低聚物的解决方案。