人胱胱硫氨酸β -合成酶无血色变体中plp结合中间体的可视化:赖氨酸119是一般基础的证据。

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艾文德，欧哈，班纳吉

人胱胱硫氨酸β -合成酶无血色变体中plp结合中间体的可视化:赖氨酸119是一般基础的证据。

生物化学学报。2004 7月15日;427(2):188-96。

PubMed ID

15196993 (PubMed视图

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摘要

胱胱硫氨酸合成酶催化丝氨酸和同型半胱氨酸的缩合，在吡哆醛磷酸(PLP)依赖反应中生成胱胱硫氨酸。人酵素每个单体含有一个单一的血红素，该血红素结合在n端69个氨基酸延伸段上，这是高度同源的酵母菌酶所缺少的。血红素主导了紫外可见光谱，掩盖了plp结合反应中间体的动力学特征。在这项研究中，我们通过删除n端69个氨基酸，设计了一个人胱硫氨酸-合成酶的无血色突变体。所得到的变体显示约40%的活性与野生型酶，结合化学计量量的PLP，并允许基于PLP的中间体的光谱表征。分离得到的酶在412nm处表现出最大吸收，对应于一个质子化的内醛定。丝氨酸的加入使lambdamax转移到420nm(指定为外醛定胺)，宽肩在450到500nm之间(指定为氨基丙烯酸酯中间体)。产物胱胱硫氨酸的加入，也导致形成一个外部阿尔丁胺(420nm)。同型半胱氨酸在光谱中从412到424nm发生红移(吸收降低)，在330nm处吸收增加，这可能是由于形成了一个终端复合物。K119(形成希夫碱的残基)突变为丙氨酸会导致活性降低约10(3)倍，而在外源碱乙胺存在时活性增加约2倍。 Spectral shifts (412 --> 420nm) consistent with the formation of external aldimines are observed in the presence of serine or cystathionine, but an aminoacrylate intermediate is not formed at detectable levels. These results are consistent with an additional role for K119 as a general base in the reaction catalyzed by human cystathionine beta-synthase.

引用本文的药物库数据

药物靶点

药物	目标	种类	生物	药理作用	行动
磷酸吡哆醛	胱硫醚beta-synthase	蛋白质	人类	未知的	代数余子式	细节