特有的蛋白N -和O-Glycosylation分析C18-Porous石墨化Carbon-Liquid Chromatography-Electrospray电离质谱方法使用链霉蛋白酶治疗糖肤。
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Stavenhagen K, Plomp R, Wuhrer M
特有的蛋白N -和O-Glycosylation分析C18-Porous石墨化Carbon-Liquid Chromatography-Electrospray电离质谱方法使用链霉蛋白酶治疗糖肤。
肛门化学。2015年12月1;87 (23):11691 - 9。doi: 10.1021 / acs.analchem.5b02366。Epub 2015年11月12日。
- PubMed ID
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26536155 (在PubMed]
- 文摘
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分析N -和O-glycopeptides仍然具有挑战性由于微观不均一性(不同的改变附加到一个糖基化的网站)和macroheterogeneity糖蛋白(站点占用)。胰蛋白酶是迄今为止最常用的蛋白酶glycoproteomic研究;然而,这往往导致长肽可以港多个多糖可能阻碍网站识别。使用非特定的蛋白酶如链霉蛋白酶可以很大程度上解决这个问题通过生成糖肤小肽部分。而产生的糖肤是非常有用的调查,串联质谱分析与传统1 d-lc-esi-ms / MS方法会导致不完整的糖基化的报道,因为非常异构糖肤根据肽序列的物理化学性质以及多糖的大小和费用一半。在这里,我们描述一个通用工作流中的N -和O-glycopeptide分析与集成链霉蛋白酶处理的糖蛋白,顺序C18反相以及多孔石墨化carbon-LC-ESI-QTOF-MS /女士使用的结合,更好的能源collision-induced离解。糖蛋白的方法是评估标准也适用于研究人类的糖基化IgG3提供细节至今无特征的糖基化网站Asn392 CH3域。这个分析工具可应用于多种糖蛋白中的N -和O-glycopeptide分析,导致一个好的糖肽覆盖在一个示例中运行,因此,只需要少量的样本。