生产过剩的牛β-酪蛋白在大肠杆菌和工程的主要凝乳酶裂解位点。
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西蒙斯G, van den Heuvel W, Reynen T,弗里吉特斯,Rutten G, Slangen CJ, Groenen M,德·沃斯·WM Siezen RJ
生产过剩的牛β-酪蛋白在大肠杆菌和工程的主要凝乳酶裂解位点。
蛋白质Eng。1993年9月,6 (7):763 - 70。doi: 10.1093 /蛋白质/ 6.7.763。
- PubMed ID
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8248100 (在PubMed]
- 文摘
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cDNA克隆含有牛β-酪蛋白A3的整个编码区两侧53个碱基对的5’非编码和358个碱基对的3 '非编码序列是孤立的从牛乳腺cDNA phagemid库。成熟的β-酪蛋白的编码段subcloned到T7表达系统,的表达重组β-酪蛋白是控制的T7 10基因启动子和核糖体结合位点。高水平表达Met-beta-casein获得了大约20%的总可溶性蛋白在大肠杆菌内2 h后诱导T7 rna聚合酶的合成。为了诱导分泌成熟的β-酪蛋白的编码段耦合ompA平移起始信号和信号肽编码序列但没有融合蛋白的分泌和处理的信号肽融合蛋白被观察到。相反,Met-beta-casein可以从E以可溶性形式被孤立。杆菌细胞渗透压休克后,表明周质的位置。这个过程没有溶解细胞。蛋白质纯化后同质性的pH值4.8等电沉淀之后,反相高效液相色谱法。β-酪蛋白cDNA改变改变主要在β-酪蛋白凝乳酶裂解位点位置192 - 193在两个方面,即从Leu-Tyr Pro-Pro Leu-stop。(抽象截断在250字)