通过泛素-蛋白酶体系统一氧化氮调节的人CYP2B6蛋白水解。

文章的细节

引用

复制到剪贴板

李，崔pathi S, Morgan ET

通过泛素-蛋白酶体系统一氧化氮调节的人CYP2B6蛋白水解。

《自由基生物医学》2017年7月;108:478-486。doi: 10.1016 / j.freeradbiomed.2017.04.015。Epub 2017年4月17日

PubMed ID

28427998 (PubMed视图

］

摘要

我们之前的研究表明，大鼠细胞色素P450 CYP2B1在炎症刺激下经历NO依赖的蛋白酶体降解，并且相关的人酶CYP2B6在原代人肝细胞中也被NO下调。为了研究CYP2B6下调的机制，我们制作了几个细胞系(HeLa和HuH7细胞)，其中原生CYP2B6或带有c端V5标签的CYP2B6 (CYP2B6V5)由带有巨细胞病毒启动子的慢病毒载体表达。在NO供体(Z)-1-[2-(2-氨乙基)- n-(2-氨乙基)氨基]重氮-1- -1,2-二酸酯处理HeLa细胞后3h内，原生CYP2B6蛋白迅速下调，而其mRNA水平未下调。用NO供体(Z)-1-[N-(3-氨基丙基)-N-(3-氨丙基)氨基]重氮-1- -1,2-二酸酯处理细胞也导致CYP2B6活性的快速下调，测量为7-羟基-4-三氟甲基香豆素的形成，以及CYP2B6 HeLa细胞系中的2B6蛋白。在HuH7细胞中，NO供体也下调了CYP2B6V5。在环己亚胺存在的情况下观察到下调，表明这是通过翻译后机制发生的。我们生成了一个表达CYP2B6V5和人一氧化氮合酶2 (NOS2)的HeLa细胞系，后者在四环素的阳性控制下。多西环素处理产生的细胞NO也有效下调了CYP2B6蛋白，而与NOS2竞争抑制剂L-N(G)-硝基精氨酸甲酯(L-NAME)联合处理可阻断CYP2B6蛋白的表达。接下来，我们研究了负责no依赖性CYP2B6降解的蛋白水解酶。钙蛋白酶抑制剂(N-Acetyl-L-leucyl-L-leucyl-L-norleucinal, carbobenzoxy-valinyl-phenylalaninal)和溶酶体蛋白酶抑制剂(3-甲基ladenine和氯quine)均不能抑制NO依赖性CYP2B6V5的下调。 The proteasome inhibitors MG132 and bortezomib attenuated, but did not completely block the NO-induced down-regulation in the HuH7 cell line. However, when cells were co-treated with NO donor and proteasome inhibitors, high molecular mass species could be detected on native CYP2B6 as well as CYP2B6V5 Western blots. Further investigation demonstrated that CYP2B6 protein was polyubiquitinated and this was dramatically enhanced by co-treatment with NO donor and bortezomib. Taken together, our data demonstrate that CYP2B6 is down-regulated in an NO-dependent manner via ubiquitination and proteasomal degradation.

引用本文的药物库数据

药物酶

药物	酶	种类	生物	药理作用	行动
一氧化氮	细胞色素P450 2B6	蛋白质	人类	未知的	抑制剂	细节