开发和验证方法使用蛋白质微阵列分析翻译修饰活动。
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德尔林康SV,罗杰斯J, Widschwendter M, D, Sieburg HB, Spruck C
开发和验证方法使用蛋白质微阵列分析翻译修饰活动。
《公共科学图书馆•综合》。2010年6月28日,5 (6):e11332。doi: 10.1371 / journal.pone.0011332。
- PubMed ID
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20596523 (在PubMed]
- 文摘
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背景:转录后修饰(天车)对稳定性的影响,细胞的位置和功能的蛋白质从而实现更大的蛋白质组的功能多样性。充分意识到天车调制信号网络,proteome-wide研究是必要的。然而,评估多功能天车proteome-wide规模技术已经被证明是困难的。促进这些分析我们已经开发出一种蛋白质芯片检测能够分析多功能天车的活动在全细胞提取物等复杂的生物混合物和病理标本。方法/主要结果:在我们的分析中,蛋白质微阵列作为衬底平台重组连接酶的体外酶促反应,或从整个细胞或病理标本提取准备覆盖。反应包括标签修饰符(例如,泛素、SUMO1或NEDD8)、ATP再生系统,和其他所需的组件(根据试验),支持修改器的接合。在这个报告中,我们应用这种方法概要三分子复杂铝(和NEDDylation ubiquitylation、类泛素化)使用纯化连接酶酶和提取准备从培养细胞系和病理标本。我们进一步证实体内修改验证这种方法的一些新颖的铝基板被我们的分析。结论/意义:这种方法提供了几个优势目前使用天车检测方法包括易用性、速度、规模、和样本来源的多样性。此外,通过允许内在酶活动的细胞群或病理状态直接比较,这种方法可以广泛的应用研究天车在人类疾病和有可能被直接应用于大多数,如果不是全部,基本天车的研究。必威国际app