测定肌酸激酶的催化部位定点诱变。
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林L, Perryman MB,弗里德曼D,罗伯茨R,马TS
测定肌酸激酶的催化部位定点诱变。
Biochim Biophys学报。1994年5月18日,1206 (1):97 - 104。
- PubMed ID
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8186255 (在PubMed]
- 文摘
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定点诱变用于改变假定催化基团的氨基酸残基半胱氨酸- 283和ATP结合位点asp - 340人肌酸激酶B的互补。此外,一个高度保守的精氨酸残基,arg - 292,也是变异。重组质粒的转染0.1比1微克成因为细胞产生细胞溶解产物肌酸激酶活动增加。突变体的表达Cys283-Tyr和Cys283-Ser导致完全废除为BB同种型酶活性没有改变的二聚作用的能力。表达突变体Arg292-His、Arg292-Leu Arg292-Gln产生非功能性为,而产生的突变Arg292-Lys表达为与酶活性是野生型的酶活性的42%。Asp340-Glu突变肌酸激酶的表达并没有改变酶活性与野生型相比。heterodimerization后,抑制了正常的突变体单元的单元,对BB和MB二聚体。结果显示残留arg半胱氨酸- 283和- 292对于酶催化至关重要。最适合的模型二聚体是一个并列的两个催化网站关闭。个人的互动在二聚单元为显性负调制提供了分子生物学方法的肌酸激酶同工酶系统在未来基因操纵实验。