定点诱变的人类lysyl羟化酶在昆虫细胞中表达。组氨酸残基的识别和天冬氨酸残基催化活性的关键。
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Pirskanen, Kaimio, Myllyla R, Kivirikko KI
定点诱变的人类lysyl羟化酶在昆虫细胞中表达。组氨酸残基的识别和天冬氨酸残基催化活性的关键。
J生物化学杂志。1996年4月19日,271 (16):9398 - 402。
- PubMed ID
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8621606 (在PubMed]
- 文摘
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Lysyl羟化酶(EC 1.14.11.4),α2为催化羟赖氨酸在胶原蛋白的形成。我们在这里表达了人类lysyl羟化酶在昆虫细胞杆状病毒载体。大约90%的是可溶性32 h感染后产生的酶,而只有10%的可溶性72 h。十二个组氨酸,五天冬氨酸,和所有四天,可以作为N-glycosylation网站转换单独丝氨酸、丙氨酸、谷氨酰胺,分别和突变酶在昆虫细胞表达。三个组氨酸突变和一个天冬氨酸突变似乎完全灭活酶。这些和其他数据表明,656年和708年组氨酸和天冬氨酸658提供的绑定所需的三个配体价催化部位,而第三重要的角色组氨酸残(706)还有待建立。三个额外的组氨酸突变也有重大的影响,尽管他们没有完全灭活酶,而六进一步组氨酸突变和四,五天冬氨酸突变的影响更小。四天冬酰胺突变数据显示只有两个潜在的N-glycosylation网站可能完全糖化昆虫细胞,这些碳水化合物单位可能需要完整的酶活性。