识别人类的囊泡单胺转运体(VMAT2)腔内形成分子内二硫键的半胱氨酸。
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Thiriot DS,西韦特可Ruoho AE
识别人类的囊泡单胺转运体(VMAT2)腔内形成分子内二硫键的半胱氨酸。
生物化学,2002年5月21日,41(20):6346 - 53年。
- PubMed ID
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12009896 (在PubMed]
- 文摘
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囊泡单胺转运体(VMAT2)集中单胺神经递质在突触囊泡。获得结构信息关于这个大膜蛋白二硫债券和其他分子内交叉连接的分析,我们设计了一个战略凝血酶裂解位点deglycosylated,人类VMAT2 HA-tagged。插入这个蛋白酶站点没有扰乱配体结合或5 -羟色胺运输。凝血酶裂解在预测工程站点细胞质跨膜域(TM) 6和7之间的循环循环(6/7)是快速和定量没有任何洗涤剂。循环6/7凝血酶站点允许评估一个分子内二硫键之间的N - c端部分的运输车。符合这一假说,后定量循环6/7凝血酶乳沟,还原剂的缺席,VMAT2迁移SDS-polyacrylamide凝胶作为一个完整的运输车辆。增加二硫苏糖醇导致完整的转换从长篇thrombin-cleaved大小,展示一个DTT-reversible共价键。disulfide-bound半胱氨酸的身份对被观察,建议更换126半胱氨酸或333半胱氨酸与丝氨酸((3)H) 5 -羟色胺减少运输。更换半胱氨酸126或半胱氨酸333被发现消除DTT-reversible分子内共价键。我们得出这样的结论:人类VMAT2半胱氨酸126年循环7/8 333年循环1/2和半胱氨酸形成二硫键导致有效的单胺运输。