激素结合域的特定区域是雄激素受体与激素结合和反式激活所必需的。
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Govindan MV
激素结合域的特定区域是雄激素受体与激素结合和反式激活所必需的。
Mol Endocrinol. 1990 3;4(3):417-27。
- PubMed ID
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2342476 (PubMed视图］
- 摘要
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以合成的与人糖皮质激素、雌二醇、孕酮和醛固酮受体同源的寡核苷酸为探针，分离编码人雄激素受体(haR)的互补DNA (cDNA)克隆，筛选人睾丸lambda gt11 cDNA文库。其中一种体外合成的受体蛋白(hARa)与[3H]脱氢睾酮([3H]DHT)结合，具有与目标组织和细胞中存在的人类雄激素受体相似的高亲和力和选择性。第二个cDNA克隆(hARb)编码一个相同的氨基酸末端和DNA结合域，但在激素结合域有四个氨基酸不同，与体外转录-翻译表达的蛋白孵育时，[3H]DHT没有高亲和力。将hARa在表达载体中与小鼠乳腺肿瘤病毒(MMTV)-细菌氯霉素乙酰转移酶嵌合质粒共转染，然后进行激素依赖的反式激活，确定hARa与[3H]DHT的结合亲和力在5 × 10(-10)和1 × 10(-9) M之间。与hARb类似的共转染实验表明，[3H]DHT的hARb的KD大约高于10(-8)m。推断出的hARa和hARb的主要结构包含在其他类固醇、甲状腺和维生素受体中发现的病毒erbA同源区域，与其他报道的hAR序列相同。氨基酸序列在n端结构域的Gly延伸段(16gly而不是27,24或23)不同，在hARb中，该序列在hARa和其他报道的hAR序列中读为I.F.F.F.F.L.L(816-822)而不是K.F.F.D.E-L(816-821)。hARb甾体结合域中四个氨基酸的差异与DHT结合的改变有关，因此在MMTV-long末端重复中缺乏通过AR响应元件的反式激活。通过凝胶阻滞法测定hARa和hARb与合成的反应元件的相互作用，以及它们对磷酸钙共沉淀反式活化的反应，证明hARb在该体系中可以抑制hARa的反式活化。