人类雄激素受体基因的单碱基突变导致雄激素完全不敏感:用改进的变性梯度凝胶电泳技术快速检测。
文章的细节
-
引用
复制到剪贴板 -
De Bellis A, Quigley CA, Cariello NF, el-Awady MK, Sar M, Lane MV, Wilson EM, French FS
人类雄激素受体基因的单碱基突变导致雄激素完全不敏感:用改进的变性梯度凝胶电泳技术快速检测。
Mol Endocrinol. 1992 11月;6(11):1909-20。
- PubMed ID
-
1480178 (在PubMed］
- 摘要
-
人类雄激素受体(AR)基因突变损害了核型男性的正常性别分化和发育，导致了从完全女性到几乎完全男性的外生殖器表型谱。这些突变的鉴定和表征可以提供有关AR特定氨基酸功能重要性的有价值的信息。为了筛选雄激素不敏感综合征(AIS)表型异常的AR基因点突变，使用聚合酶链式反应(PCR)从基因组DNA中扩增AR基因的8个外显子，并通过变性梯度凝胶电泳进行分析。利用计算机程序MELTMAP来确定变性梯度凝胶电泳的最佳序列，并通过在对照和被试PCR产物之间形成异质双工链来产生碱基错配来提高突变检测的灵敏度。在七个完全AIS的家族中，在AR基因编码受体的类固醇结合域区域发现了单碱基突变。将Arg中的774氨基酸转化为His, Asp中的864氨基酸转化为Gly的突变体通过位点定向突变和COS 7和CV1细胞中表达的突变ARs重新构建。在这两种情况下，雄激素结合和转录激活的异常与观察到的性别表型一致。这些结果和之前报道的其他结果一起表明，AR基因外显子D到H编码区域内的单个氨基酸的改变可以改变雄激素结合，是完全雄激素抵抗的常见原因。本文采用变性梯度凝胶分析异质双工PCR产物的策略，为AIS单碱基突变的快速检测提供了有价值的帮助。