人SR 31747a结合蛋白的纯化与鉴定。一种与酵母固醇异构酶有关的核膜蛋白。
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Jbilo O, Vidal H, Paul R, De Nys N, Bensaid M, Silve S, Carayon P, Davi D, Galiegue S, Bourrie B, Guillemot JC, Ferrara P, Loison G, Maffrand JP, Le Fur G, Casellas P
人SR 31747a结合蛋白的纯化与鉴定。一种与酵母固醇异构酶有关的核膜蛋白。
《生物化学杂志》1997年10月24日;272(43):27107-15。
- PubMed ID
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9341151 (PubMed视图］
- 摘要
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SR 31747A被定义为sigma配体，是一种新型的免疫抑制剂，可以阻止人和小鼠淋巴细胞的增殖。使用放射性标记的化学探针，我们在这里纯化了SR 31747A的一个靶点，并称之为SR 31747A结合蛋白(SR- bp)。纯化的SR-BP保留了其结合特性，并以Mr 28000蛋白的形式在sds -聚丙烯酰胺凝胶上迁移。克隆的编码人类SR-BP的cDNA显示了一个223氨基酸蛋白的开放阅读框，该蛋白与最近克隆的sigma 1受体同源。有趣的是，推导出的氨基酸序列被发现与真菌C8-C7甾醇异构酶有关，由ERG2基因编码。ERG2基因产物最近被确定为SR 31747A的分子靶点，它介导药物在酵母中的抗增殖作用。Northern blot检测SR-BP基因表达，发现一个2千碱基的单转录本，广泛在器官中表达，肝脏中表达量最高，大脑中表达量最低。使用针对SR-BP的特异性单克隆抗体在各种细胞中进行亚细胞定位分析，证明该蛋白与核膜有关。当研究SR 31747A在表达SR- bp的酵母膜上的结合时，我们发现了sigma 1受体的药理学特征;结合被(+)-戊唑辛、氟哌啶醇和(+)- skf 10047取代，其中(+)- skf 10047是比(-)- skf 10047更有力的竞争对手。 Scatchard plot analysis revealed Kd values of 7.1 nM and 0.15 nM for (+)-pentazocine and SR 31747A, respectively, indicating an affinity of SR-BP 50-fold higher for SR 31747A than for pentazocine. Additionally, we showed that pentazocine, a competitive inhibitor of SR 31747A binding, also prevents the immunosuppressive effect of SR 31747A. Taken together, these findings strongly suggest that SR-BP represents the molecular target for SR 31747A in mammalian tissues, which could be critical for T cell proliferation.