识别必不可少的半胱氨酸残基的吡哆醛磷酸酶人类红细胞。
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高G,方达毫升
识别必不可少的半胱氨酸残基的吡哆醛磷酸酶人类红细胞。
J生物化学杂志。1994年3月18日,269 (11):8234 - 9。
- PubMed ID
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8132548 (在PubMed]
- 文摘
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Pyridoxal-specific磷酸酶纯化从人类红细胞被各种thiol-specific试剂灭活时间和浓度的方式。磷酸吡哆醛,基质、无机磷酸盐、竞争性抑制剂,保护酶的失活。磷酸酶灭活由二硫化试剂被激活的多余的二硫苏糖醇,表明失活的原因是形成一个混合试剂和一个免费的半胱氨酰残基之间的二硫或接近酶的活性部位。公司的1摩尔的5、5 ' -dithiobis (2-nitrobenzoic酸)(DTNB), 0.6摩尔的碘乙酸[3 h],或0.6摩尔的N - [3 h] ethylmaleimide每摩尔的亚基酶完全失活。高浓度的磷酸盐阻止DTNB的整合和碘乙酸[3 h]。羧甲基化酶和氨基酸分析DTNB滴定的变性磷酸酶表示,可能有1半胱氨酰残每单元。碘乙酸修改不影响酶的四级结构。磷酸酶修改由乙酸碘[3 h]受到胰蛋白酶消化,和由此产生的肽分离C18柱反向阶段。两个放射性峰值得到和包含一个肽的氨基端序列Ala-Gln-Gly-Val-Leu-Phe-Asp-Cys -Asp-Gly-Val-Leu-X-Asn-Gly(厘米)。大部分的放射性物质被释放与半胱氨酸(Cm)。 These results indicate that the cysteinyl residue in this sequence is at or near the active site and is essential for activity. Residues 5-12 and 15 of this peptide are identical with a sequence of a yeast alkaline p-nitrophenylphosphatase, and the peptide has little homology with other mammalian phosphatases.