改变疏水袋的口部。人碳酸酐酶II突变体残基Val-121的结构和动力学。
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Nair SK, Calderone TL, Christianson DW, Fierke CA
改变疏水袋的口部。人碳酸酐酶II突变体残基Val-121的结构和动力学。
中国生物化学杂志。1991年9月15日;266(26):17320-5。
- PubMed ID
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1910042 (PubMed视图］
- 摘要
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通过位点定向诱变构建了人碳酸酐酶II在Val-121位点的11个氨基酸替换，包括Gly、Ala、Ser、Leu、Ile、Lys和Arg。这种残基位于酶活性位点疏水袋的口部。这些CAII变体的CO2水解酶活性和对硝基苯酯酶活性与残基的疏水性相关，表明残基的疏水性对催化作用很重要。这些突变对CO2水化反应稳态动力学的影响主要体现在kcat/Km和Km，与这些残基参与CO2缔合相一致。Val-121----Ala突变体表现出约三分之一的正常CO2水解酶活性，已通过x射线晶体学方法进行了研究。与野生型酶相比，突变型酶的构象没有明显变化。由于Val-121位于疏水袋口，它被丙氨酸甲基侧链取代，使得疏水袋口明显比野生型酶宽。因此，虽然适度宽(深)的口袋对于底物的结合很重要，但这个口袋的宽口并不会严重影响CO2对亲核锌结合氢氧化物的催化方法。