人碳酸酐酶锌结合位点的工程研究:His-94- >Cys脱酶的新晶体结构。
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Alexander RS, Kiefer LL, Fierke CA, Christianson DW
人碳酸酐酶锌结合位点的工程研究:His-94- >Cys脱酶的新晶体结构。
生物化学。1993 Feb 16;32(6):1510-8。
- PubMed ID
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8431430 (PubMed视图］
- 摘要
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用x射线晶体学方法测定了人碳酸酐酶II (CAII)的His-94—>Cys变体的结构，其分辨率为2.3 a，最终晶体学R因子为0.155。CAII的这种变体结晶在正交空间群P2(1)2(1)2(1) 2(1)中，这是这种重要的锌水解酶的新晶体形式的第一个例子(野生型酶在相似的结晶条件下结晶在单斜空间群P21中)。虽然该酶的正交晶体形式的整体结构与单斜晶体形式的野生型蛋白质相似，但两种结构之间C -原子的均方根偏差为0.5 A。较大的结构偏差发生在蛋白质分子中涉及晶格接触的区域，并且在含有Cys-94的多肽链中发现了显著的结构变化。令人惊讶的是，在结晶he -94—>Cys CAII的活性位点上没有发现对应于锌离子的电子密度，尽管锌在溶液中与该变体结合的化学计量学已通过原子吸收光谱证实。然而，与野生型酶相比，突变体锌解离的KD增加了10(4)倍;此外，在高离子强度(1.75 M ~ 2.5 M硫酸铵)的结晶条件下，观察到的KD进一步增加，从而导致锌的解离。Co(2+)-取代His-94—>Cys CAII的光谱分析表明，金属以四面体几何形式与一个新的硫酸键结合。(摘要删节至250字)