筛查突变表达病人cDNA片段在大肠杆菌:高胱氨酸尿由于胱硫醚beta-synthase缺乏症。
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Kozich V,克劳斯JP
筛查突变表达病人cDNA片段在大肠杆菌:高胱氨酸尿由于胱硫醚beta-synthase缺乏症。
哼Mutat。1992; 1(2): 113 - 23所示。
- PubMed ID
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1301198 (在PubMed]
- 文摘
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缺乏胱硫醚beta-synthase (CBS)原因最常见的遗传性高胱氨酸尿。我们开发了一个简单的CBS在大肠杆菌表达系统筛选致病突变在受影响的个人。部分病人的互补放大了PCR和用于替换相应的段细菌的正常的人类CBS cDNA表达质粒pHCS3。混合哥伦比亚广播公司(CBS)的片段在大肠杆菌表达,病人的cDNA熄灭CBS活动被测序确定突变。pyridoxine-responsive病人的研究首次使用这个克隆的屏幕显示,包含中间或3 '部分他的cDNA、一半是没有催化活性。影响后续的测序部分证实了孕产妇T833 - - > C过渡的复合杂合性(I278T)和父亲的C - - >颠换的基因内区11拼接受体。后者的突变导致了在坐标系删除外显子12(1224 - 1358元,氨基酸W408 G453)。这细菌表达系统被证明是一个快速筛选方法本地化致病性突变在哥伦比亚广播公司(CBS),允许我们序列变异的影响部分cDNA收获后7 - 10天内培养的成纤维细胞。