人胸腺酸合成酶在小鼠FM3A细胞过度生产转化体中的纯化和nh2端氨基酸序列。
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清水K, Ayusawa D，武石K, Seno T
人胸腺酸合成酶在小鼠FM3A细胞过度生产转化体中的纯化和nh2端氨基酸序列。
生物化学学报。1985 3;97(3):845-50。
- PubMed ID
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3839505 (PubMed视图］
- 摘要
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人胸苷合成酶[EC 2.1.1.45]经纯化至均一性，并利用以下事实确定其nh2末端氨基酸序列:i)酶的来源为小鼠FM3A突变细胞的转化体，该突变细胞缺乏小鼠胸苷合成酶，但过量产生人胸苷合成酶。ii)该酶可在两种亲和柱上纯化，即Cibacron blue染料结合的琼脂糖和甲氨蝶呤结合的Sepharose。iii)通过在含有十二烷基硫酸钠的聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳，最终可以将酶从微量杂质中分离出来。经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，纯化的人胸腺苷合成酶的亚基分子量为33000。对酶进行Edman降解，用高灵敏度气相蛋白测序仪和高效液相色谱连续测定nh2端24个氨基酸序列为:pro - val - ala - gly - ser - glu - leu - arg - arg - pro - leu - pro - ala - ala - gln - glu - Arg-Asp - ala - glu - pro - arg -。