抗甲氨蝶呤的人类二氢叶酸还原酶的变种与亮氨酸22的替代。动力学，结晶学和电位作为可选择的标记。
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Lewis WS, Cody V, Galitsky N, Luft JR, Pangborn W, Chunduru SK, Spencer HT, Appleman JR, Blakley RL
抗甲氨蝶呤的人类二氢叶酸还原酶的变种与亮氨酸22的替代。动力学，结晶学和电位作为可选择的标记。
中华生物化学杂志。1995 3月10日;270(10):5057-64。
- PubMed ID
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7890613 (PubMed视图］
- 摘要
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虽然在人类二氢叶酸还原酶中，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸或精氨酸对亮氨酸22的替代大大减缓了氢化物的转移，但在pH值7.65时，总体活性(kcat)几乎没有损失(精氨酸22变体除外)，但二氢叶酸和NADPH的Km显著增加。最大的影响是，由于甲氨蝶呤解离率的大幅增加，甲氨蝶呤与酶- nadph复合物的结合减少了740-到28000倍，这使得这些变体适合作为可选择的标记。其他四种抑制剂的亲和性也大大降低。甲氨蝶呤与脱酶的结合减少得更少(减少120倍)，四氢叶酸的结合减少23倍，二氢叶酸的结合减少很少或增加。三种变体的三元配合物的晶体结构表明，突变对蛋白质的主链、其他活性位点残基的侧链或结合抑制剂的扰动很小。最大的结构偏差发生在残基21-27上精氨酸变体的三元配合物和甲氨蝶呤的取向上。酪氨酸22和精氨酸22通过占据低概率构象缓解与甲氨蝶呤和NADPH的短接触，但这对于吡瑞瑞辛复合物中的苯丙氨酸22来说是不必要的。