定点诱变活性部位半胱氨酸的克雷伯氏菌aerogenes脲酶。
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马丁公关,Hausinger RP
定点诱变活性部位半胱氨酸的克雷伯氏菌aerogenes脲酶。
生物化学杂志。1992年10月5日;267 (28):20024 - 7。
- PubMed ID
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1400317 (在PubMed]
- 文摘
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半胱氨酸的319大亚基的克雷伯氏菌aerogenes脲酶被确认为一个重要的催化残基(托德,M.J.基于化学改性研究,Hausinger r(1991)生物。266年化学,24327 - 24331)。通过定点诱变,这改变了半胱氨酸独立丙氨酸,丝氨酸,天冬氨酸和酪氨酸。这些突变(分别C319A, C319S、C319D和C319Y)影响的大小或水平的合成脲酶亚基所监控的聚丙烯酰胺凝胶电泳。野生型酶,每个突变蛋白的纯化及其性质进行了比较。C319Y蛋白不具有检测活动,尽管C319A活动减少,C319S, C319D 48, 4.5和0.03%的野生型水平在正常试验条件。所有活跃的突变体有一个小公里与野生型相比增加价值。活性突变体显示一个大大减少碘乙酰胺对失活的野生型酶相比,证实了我们之前的作业基本半胱氨酸的残渣基于活性位点的肽映射。与野生型酶相比,突变体蛋白的失活是不受竞争抑制剂磷酸的存在,表明剩余碘乙酰胺的速度失活是由于改性活性部位。pH值依赖的脲酶活性显著改变活性突变体与C319S C319D显示最佳pH值在5.2附近,附近C319A 6.7,相对于野生型脲酶的最佳pH值7.75。 These data are consistent with Cys-319 facilitating catalysis at neutral and basic pH values by participating as a general acid.