克雷伯氏菌aerogenes脲酶的定点诱变:识别的组氨酸残基函数在镍结扎,底物结合和催化作用。
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公园,Hausinger RP
克雷伯氏菌aerogenes脲酶的定点诱变:识别的组氨酸残基函数在镍结扎,底物结合和催化作用。
蛋白质科学。1993年6月;2 (6):1034 - 41。
- PubMed ID
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8318888 (在PubMed]
- 文摘
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比较六脲酶序列显示10守恒的组氨酸残基的存在(H96γ亚基,H39 H41测试版,和H134 H136, H219, H246, H312, H320,和克雷伯氏菌的α亚基H321 aerogenes酶)。这些残留在k aerogenes脲酶和丙氨酸取代由定点诱变和突变蛋白纯化和特征以确定必要的组氨酸残基,并分配角色。γH96A、βH39AβH41A,αH312A和αH321A突变蛋白具有活动和镍含量与野生型酶相似,表明这些残留物并不是必不可少的衬底绑定,催化,或金属绑定。相比之下,阿尔法H134AαH136A和αH246A蛋白质表现出没有检测到活动和拥有53%,6%,和21%的镍含量的野生型酶。这些结果是一致的αH134αH136,αH246功能镍配体。阿尔法H219A蛋白质是活跃和镍(分别约1.9%和80%,与野生型相比,蛋白质)但展品公里价值很高(1100 + / - 40毫米2.3 + / - 0.2毫米相比野生型酶)。这些结果与αH219兼容有一些作用底物绑定。最后,αH320A蛋白质(公里= 8.3 + / - 0.2毫米)只显示大约0.003%的野生型酶活性,尽管有一个正常的镍含量。(抽象截断在250字)