克雷伯氏菌的化学救援aerogenes脲酶变异缺乏carbamylated-lysine镍配位体。
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皮尔森马,夏勒RA,米歇尔•罗Karplus PA, Hausinger RP
克雷伯氏菌的化学救援aerogenes脲酶变异缺乏carbamylated-lysine镍配位体。
生物化学。1998年4月28日,37 (17):6214 - 20。
- PubMed ID
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9558361 (在PubMed]
- 文摘
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克雷伯氏菌aerogenes脲酶具有双核的metallocenter两个镍原子的桥接carbamylated Lys217。评估是否需要carbamate-specific化学对脲酶活性,定点诱变和化学救援策略相结合,努力将羧基在这种金属配体的位置。脲酶变异与Lys217取代Glu、半胱氨酸和阿拉巴马州(K217E、K217C / C319A K217A蛋白质)净化,显示激活孵化小有机酸+镍(II),和结构特征。K217C / C319A脲酶拥有第二个改变是Cys319取代了阿拉巴马州,以促进化学修改Cys217努力;然而,这没有产生积极的脲酶共价改性方法。化学救援的K217E K217C / C319A和K217A变种2,2,和10 h,分别达到最大活动水平。最高的尿素生成活动[224 micromol degraded.min-1。(1毫克的蛋白质),K217C / C319A脲酶孵化与500毫米甲酸和10毫米倪在pH值6.5)与56%的野生型脱辅基蛋白的体外激活来衡量。虽然K217E脱辅基蛋白显示最小结构扰动,K217C / C319A脱辅基蛋白表现出无序化的活性位点残基,和K217A脱辅基蛋白透露His219允许的重新定位与Thr169氢键的形成,从而取代氨基之间的氢键Lys217和Thr169原生酶。重要的是,这些结构允许相对利率的合理化和收益率的化学救援实验。 The crystal structures of chemically rescued K217A and K217C/C319A ureases revealed a return of the active site residues to their wild-type positions. In both cases, noncovalently bound formate was structurally equivalent to the Lys-carbamate as the bridging metallocenter ligand. We conclude that carbamate-specific chemistry is not required for urease catalysis.