衬底绑定和催化精氨酸:甘氨酸amidinotransferase——诱变和晶体研究。
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Fritsche E,嗯,Huber R
衬底绑定和催化精氨酸:甘氨酸amidinotransferase——诱变和晶体研究。
欧元。1997 7月15日,247 (2):483 - 90。
- PubMed ID
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9266688 (在PubMed]
- 文摘
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精氨酸:甘氨酸amidinotransferase催化肌酸的生物合成的关键步骤。八个活性位点突变体、D170N D254N、H303V D305A, R322E, S355A, C407S,和C410A重组人类精氨酸:甘氨酸amidinotransferase是由定点诱变和保持酶的特征。三个突变体的晶体结构D170N, D254N,和C407S已经确定为0.28 nm,分别为0.29 nm和0.236纳米的分辨率。活性位点残基的突变参与substrate-binding不活跃的突变体。Asp254替换,并不直接参与底物结合但被认为与质子转移His303咪唑组,结果在一个强烈(2000倍)减少活动。然而,Cys410的替换,残留活性部位附近,但没有参与催化或衬底绑定,在阿拉巴马州并没有改变对野生型酶的动力学属性。D170N酶活性的丧失,D254N, C407S和可能的其他所有突变体是完全由于插入的点突变,影响衬底绑定或过渡态的稳定,而不是由于主要构象的重组蛋白质。这些结果表明,一双His-Asp衬底和半胱氨酸的一边另一边是活动的关键残基,一个不相交的三合会的一部分。他提出的咪唑环作为一般酸/一般碱在催化而半胱氨酸作为亲核试剂的类似于Cys25 papain-like半胱氨酸蛋白酶。