表达克隆beta-tubulin Haemonchus基因在大肠杆菌contortus:交互的重组beta-tubulin原生微管蛋白和甲苯咪唑。

文章的细节

引用

复制到剪贴板

Lubega GW, Geary TG、克莱因RD RK普里查德

表达克隆beta-tubulin Haemonchus基因在大肠杆菌contortus:交互的重组beta-tubulin原生微管蛋白和甲苯咪唑。

摩尔生物化学Parasitol。1993年12月,62 (2):281 - 92。

PubMed ID

8139621 (在PubMed

]

文摘

两个截然不同的beta-tubulin cDNA同形像(cbt)和β-β)Haemonchus contortus首次被表达在大肠杆菌和特点是其特定甲苯咪唑(MBZ)绑定和聚合属性。Beta-tubulin表示没有转化大肠杆菌融合到一个序列中的色氨酸启动子的调控下pTrp2向量。Beta-tubulin在大量生产不溶性包涵体。包涵体的纯化和水溶性beta-tubulin用尿素治疗之后,稀释与碱性缓冲和转向生理博士收益率超过10毫克每升beta-tubulin的细胞培养。产生的重组微管蛋白在免疫印迹识别特定anti-beta-tubulin抗体。氚化MBZ绑定到重组h . contortus beta-tubulin测量的存在与否,tubulin-free或h . contortus tubulin-rich提取物。一些[3 h] MBZ高亲和性结合(HB)“纯”(没有其他真核蛋白质存在)观察β8 - 9或β12日至16日。增强的高亲和性结合观察当重组β8 - 9或β12日至16日涨跌互现,pre-incubated整个上层清液或从h . contortus tubulin-enriched提取物。增强添加剂。β12到16绑定MBZ并造成更大的增强比β8 - 9。 Mixing recombinant beta 8-9 or beta 12-16 with whole supernatants or tubulin-enriched fractions from H. contortus promoter polymerization at 37 degrees C. Use of 35S-labelled protein showed that the polymer contained recombinant tubulin. Western blot using specific anti-alpha-tubulin monoclonal antibodies showed that the polymer contained alpha-tubulin. Similarly the recombinant nematode beta-tubulin co-polymerized with tubulin from chicken brain. Our data suggest that the recombinant beta-tubulin can interact and copolymerize with parasite or chicken tubulin. Furthermore the interaction of recombinant nematode beta-tubulin with native tubulin and/or microtubule associated proteins (MAPs) resulted in the formation of high-affinity MBZ-binding sites. However, interaction of recombinant beta-tubulin with microtubule proteins from chicken brain did not result in the formation of high-affinity MBZ-binding sites.

DrugBank数据引用了这篇文章

药物靶点

药物	目标	类	生物	药理作用	行动
甲苯咪唑	微管蛋白alpha-1A链	蛋白质	人类	是的	抑制剂	细节
甲苯咪唑	微管蛋白beta-4B链	蛋白质	人类	是的	抑制剂	细节