识别的蛋白质O-glycosylation网站使用液体chromatography-tandem质谱和相应的聚糖通过映射准确的质量和保留时间的转变。
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林黄LJ, JH,蔡JH,楚YY,陈YW,陈SL,陈SH
识别的蛋白质O-glycosylation网站使用液体chromatography-tandem质谱和相应的聚糖通过映射准确的质量和保留时间的转变。
J Chromatogr a . 2014年12月5日,1371:136-45。doi: 10.1016 / j.chroma.2014.10.046。Epub 2014年11月1日。
- PubMed ID
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25456591 (在PubMed]
- 文摘
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我们报道一种改进的组合方法来识别特定站点O-glycosylation使用聚糖裂解和non-cleaved方法。在这种方法中,一个非还beta-elimination装备加上非特异性酶进行高效的消化,O-glycan乳沟,和部分脱磷酸作用没有明显的副反应,从而使自动数据库搜索裂解O-glycosylation或丝氨酸/苏氨酸磷酸化网站(S / T)。必威国际app同时从同一样本没有beta-elimination,准备相应的完整O-glycopeptides被准确映射前体离子质使用内部多糖数据库主要由GalNAc (mucin-type)核心和保留时间的转变(DeltaRt)。每个糖肽检测的任务是验证glycan-specific片段使用collision-induced离解(CID)估计错误发现率(罗斯福)。使用胎球蛋白作为模型,确定S / T消除网站都匹配多个完整糖肤罗斯福为31%。这大大减少0%罗斯福DeltaRt过滤。这种方法被应用于蛋白质混合物组成的治疗因子IX和恩利((R))混合胎球蛋白和kappa-casein。总共26个糖基化网站每个对应1 - 4聚糖积极映射和确认。罗斯福从33%下降到3.3%,DeltaRt过滤和排除重复相同的糖基化肽标签覆盖了网站。此外,磷酸化和O-glycosylation在同一站点T159等因子IX和T170 kappa-casein能够明确区分。 Thus, our approach is useful for in-depth characterization of site-specific O-glycosylation of a simple mixture such as protein-based therapeutics.