人γ -谷氨酰基羧化酶自然突变L394R的表达与表征。
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Mutucumarana VP, Stafford DW, Stanley TB, Jin DY, Solera J, Brenner B, Azerad R，吴sm
人γ -谷氨酰基羧化酶自然突变L394R的表达与表征。
中国生物化学杂志，2000 10月20日;
- PubMed ID
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10934213 (PubMed视图］
- 摘要
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γ -谷氨酰羧化酶L394R突变患者有严重的出血障碍，因为所有依赖维生素k的凝血蛋白的生物活性下降。服用维生素K可以部分地纠正这种缺陷。为了鉴定L394R，我们纯化了在杆状病毒感染的昆虫细胞中表达的重组突变体L394R和野生型羧化酶。通过动力学研究，我们分析了突变体L394R的催化活性及其与因子IX的前肽和维生素KH的结合(2)。突变体L394R与野生型的差异如下:1)Boc-mEEV的K(i)比野生型高110倍，Boc-mEEV是一种活性的FLEEL位点特异性竞争性抑制剂;2)在前肽存在的情况下，向底物FLEEL降低30倍V(max)/K(m);3)在缺乏前肽的情况下，对FLEEL羧化的活性严重降低;4)前肽亲和力降低7倍;5) FIXproGla的K(m)高9倍，该底物含有人因子IX的前肽和Gla结构域;维生素KH(2) K(m)高5倍。 The primary defect in mutant L394R appears to be in its glutamate-binding site. To a lesser degree, the propeptide and KH(2) binding properties are altered in the L394R mutant. Compared with its wild-type counterpart, the L394R mutant shows an augmented activation of FLEEL carboxylation by the propeptide.