二硫桥必不可少的传输函数的识别人类proton-coupled氨基酸转运hPAT1。
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多恩M, Weiwad M, Markwardt F, Laug L,鲁道夫R, Brandsch M, Bosse-Doenecke E
二硫桥必不可少的传输函数的识别人类proton-coupled氨基酸转运hPAT1。
生物化学杂志。2009年8月14日;284 (33):22123 - 32。doi: 10.1074 / jbc.M109.023713。Epub 2009年6月23日。
- PubMed ID
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19549785 (在PubMed]
- 文摘
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proton-coupled氨基酸转运蛋白1 (PAT1 SLC36A1)介导小中性氨基酸的吸收后在肠道上皮细胞顶膜蛋白质的消化。目前运输车在强大的调查,因为它是一个可能的车辆口服给药。等结构特点的蛋白质跨膜域的数量,底物结合位点或必需氨基酸仍然未知。在目前的研究中我们使用诱变实验和生物化学的方法来确定三个假定的细胞外的半胱氨酸残基的作用传递函数及其可能的参与形成二硫桥。治疗以减少试剂二硫苏糖醇hPAT1野生型蛋白的运输功能受损,替换假定的细胞外半胱氨酸残基半胱氨酸- 180,半胱氨酸- 329,由丙氨酸、丝氨酸和半胱氨酸- 473执行。更换两个高度保守的半胱氨酸残基半胱氨酸- 180和半胱氨酸- 329年非洲爪蟾蜍废除hPAT1的传输函数光滑的卵母细胞。研究野生型和突变体转运蛋白表达在人类视网膜色素上皮细胞(HRPE)建议绑定在这些突变体的底物抑制。替换第三假定的细胞外nonconserved半胱氨酸残基半胱氨酸- 473不影响运输功能。突变体都是在细胞膜上表达。使用maleimide-PEG自由巯基的生物素酰化组(11)生物素和sds - page分析在减少和nonreducing条件下提供直接证据存在的一个重要的二硫键之间的半胱氨酸- 180和半胱氨酸- 329。 This disulfide bridge is very likely involved in forming or stabilizing the substrate binding site.