cDNA克隆扩增的环状第一链cDNA揭示non-IRE-regulated iron-responsive mrna。
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你们Z,康纳
cDNA克隆扩增的环状第一链cDNA揭示non-IRE-regulated iron-responsive mrna。
生物化学Biophys Res Commun。2000年8月18日,275 (1):223 - 7。
- PubMed ID
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10944468 (在PubMed]
- 文摘
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目前,快速放大cDNA结束(种族)是最常见的方法PCR克隆的互补。因为种族基因特定的引物和使用一个适配器底漆,是由所有的互补共享可能导致大量非特异性克隆产品,可以阻碍的过程。这里我们首先报道了一种新的方法,使用环状链cDNA mRNA和两个特定的引物来扩增基因5’和3’cDNA结束在一个反应。cDNA带正确的大小可以得到第一个通过这种方法。如果没有得到正确的尺寸在第一次通过,放大的互补脱氧核糖核酸可以重复,直到结束的正确大小的互补。我们测试了这种新方法在八mrna,我们以前对细胞铁水平。我们获得的序列6 mrna, 43个基点,至1324个基点的时间比在基因库和获得其他两个信使rna序列长度相同。RNA折叠程序没有响应铁元素在这些信使RNA(愤怒)。总之,我们克隆的方法提供了一个更高效的方法克隆全长cDNA,它可以用来替换现有的5 '末端cDNA扩展的方法。数据使我们能够排除这种可能性,这些铁反应基因的表达受忿怒。