N-Glycosylation人类κ阿片受体增强其稳定性但放缓其沿着生物合成途径贩卖。
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李詹,陈C,刘晨LY
N-Glycosylation人类κ阿片受体增强其稳定性但放缓其沿着生物合成途径贩卖。
生物化学。2007年9月25日,46 (38):10960 - 70。Epub 2007年8月21日。
- PubMed ID
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17711303 (在PubMed]
- 文摘
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我们检查了糖基化FLAG-hKOR CHO细胞表达和确定其功能意义。FLAG-hKOR解决广泛而分散55-kDa乐队和不扩散45-kDa乐队通过免疫印迹,表明受体是糖化。Endoglycosidase H裂解45-kDa乐队大约38 kDa但没有改变55-kDa乐队,证明45-kDa乐队N-glycosylated high-mannose或混合型多糖。Peptide-N-glycosidase F消化细胞的可溶性hKOR或孵化衣霉素导致两种43和38 kDa,表明O-glycosylated 43-kDa乐队。FLAG-hKOR减少到较低的乐队由神经氨酸酶和O-glycosidase先生表明hKOR包含O-linked多糖。突变Asn25或Asn39 Gln的n端结构域,减少了大约5 kDa,表明残留都糖化。双突变体hKOR-N25/39Q被解析为43-kDa(成熟的形式)和38-kDa(中间形式)乐队。当瞬变表示,hKOR-N25/39Q表达水平低于野生型。hKOR-N25/39Q CHO细胞中稳定表达,脉冲追踪实验显示,中间的周转速率常数(ke)和成熟形式是野生型的大约3倍。此外,成熟速率常数(ka) 43-kDa hKOR-N25/39Q形式的6倍的成熟形式野生型。 The hKOR-N25/39Q mutant showed increased agonist-induced receptor phosphorylation, desensitization, internalization, and downregulation, without changing ligand binding affinity or receptor-G protein coupling. Thus, N-glycosylation of the hKOR plays important roles in stability and trafficking along the biosynthesis pathway of the receptor protein as well as agonist-induced receptor regulation.