丝氨酸228对85-kDa胞质磷脂酶A2的催化活性至关重要。
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夏普JD，皮卡德RT, Chiou XG, Manetta JV，科瓦切维奇S，米勒JR，瓦尔沙夫斯基AD，罗伯茨EF, Strifler BA，布莱姆斯DN，等。
丝氨酸228对85-kDa胞质磷脂酶A2的催化活性至关重要。
生物化学杂志。1994 9月16日;269(37):23250-4。
- PubMed ID
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8083230 (在PubMed］
- 摘要
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Ca(2+)敏感的胞质磷脂酶A2 (cPLA2)具有磷脂酶A2和溶血磷脂酶活性。许多水解酶，包括脂肪酶，通过含有丝氨酸或半胱氨酸残基的氨基酸活性位点三位一体催化酯键的水解。我们用定点突变的方法检测了人类cPLA2是否属于这类酶。尽管巯基试剂n -乙基马来酰亚胺使cPLA2化学失活，表明半胱氨酸可能是催化所必需的，但cPLA2的所有9个半胱氨酸残基被证明是可有可无的，当被丙氨酸取代时，使酶活性接近正常水平。我们注意到cPLA2含有110个氨基酸区，与青霉中的磷脂酶B (PLB)序列同源。有趣的是，cPLA2的一个保守丝氨酸Ser-228在该结构域内与PLB的脂肪酶一致性序列Gly-X(Leu)-Ser(137)-X(Gly)-Gly对齐。用丙氨酸(或苏氨酸或半胱氨酸)取代Ser-228产生催化活性不强的cPLA2，即使CD光谱测定的原构象保持不变。同样，Ser-228突变也完全消除了溶血磷脂酶的活性。相比之下，三种不同的cPLA2丝氨酸(Ser-195, Ser-215，或Ser-577)被丙氨酸取代，也与PLB序列一致，允许cPLA2的大量酶活性。我们的研究结果证明:1)Ser-228参与了cPLA2的催化机制;2)cPLA2的磷脂酶A2和溶血磷脂酶活性是由相同的活性位点残基所催化的。