超表达和描述人类的盐皮质激素受体。
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Alnemri ES Maksymowych AB,罗伯逊NM, Litwack G
超表达和描述人类的盐皮质激素受体。
生物化学杂志。1991年9月25日,266 (27):18072 - 81。
- PubMed ID
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1655735 (在PubMed]
- 文摘
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完整的人类肾盐皮质激素受体(hMR)一直在过度繁殖Spodoptera frugiperda (Sf9)昆虫细胞使用baculovirus-mediated表达式。过度繁殖hMR高亲和力结合醛固酮(Kd = 1.36海里)和皮质醇有很高的亲和力,cortexolone和孕激素。免疫沉淀反应和免疫印迹分析重组hMR MR-specific抗体显示三个主要蛋白质分子质量为115,119和125 kDa。hMR亚型显示最大积累与重组杆状病毒感染后48 h。最大发现醛固酮绑定在24小时而不是在感染后48 h,这表明hMR单体组装到未激活的类固醇结合受体复合物和/或感染后24 h后其稳定性恶化。据估计通过特定的醛固酮绑定1.2 x 10 (6) hMR分子表达/ Sf9细胞(相当于7 pmol /毫克的胞质蛋白)在感染后24 h。5倍更多的受体分子/细胞表达但没有检测到类固醇绑定在感染后48 h由免疫印迹分析。使用MR-specific H10E anti-idiotypic单克隆抗体,免疫沉淀反应的胞质重组baculovirus-infected Sf9细胞pulse-labeled 32π首次证明重组hMR高度磷酸化。hMR表示为9至10 S低聚物的复合物(斯托克斯半径约67 - 85),略重比未激活的糖皮质激素受体,可以转换为小4 S受体单体(斯托克斯半径大约25-55)升高温度、pH、离子强度。与糖皮质激素受体,寡聚hMR复杂可以绑定DNA-cellulose事先激活。 Finally, indirect immunofluorescence demonstrated that the hMR is expressed primarily as a cytoplasmic protein that can be induced to translocate to the nucleus upon treatment with hormone.