人类性激素结合球蛋白变体的分子分析:额外碳水化合物链的证据。
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Power SG, Bocchinfuso WP, Pallesen M, Warmels-Rodenhiser S, Van Baelen H, Hammond GL
人类性激素结合球蛋白变体的分子分析:额外碳水化合物链的证据。
临床内分泌病学杂志1992年10月;75(4):1066-70。
- PubMed ID
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1400872 (在PubMed］
- 摘要
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基因组DNA是从性激素结合球蛋白(SHBG)的纯合子个体中分离出来的，在变性条件下(十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)，SHBG变异会分解成三种分子量为56K、52K和48K的形式。该材料在聚合酶链反应中用内含子特异性寡核苷酸引物进行扩增，获得编码SHBG的8个外显子。对这些外显子的序列分析显示，在SHBG多肽的第327位残基上编码氨基酸取代(Asp—> Asn)的点突变，在3个兄弟姐妹中也发现了同样的突变，他们似乎也是该性状的纯合子。该突变在该位置引入了一个额外的n -糖基化共识位点，为了确认其利用，我们将其引入到人类SHBG互补DNA中。将突变的互补DNA插入pRc/CMV表达载体，转染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。该产物正常分泌，但与CHO细胞产生的正常SHBG(85%)或正常个体或产生电泳变体的血清SHBG(98%)相比，与刀豆蛋白A结合的产物比例较少(54%)。此外，经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blotting检测，CHO细胞产生的SHBG变异由60K亚基以及与CHO细胞产生的正常SHBG相关的重(52K)和轻(48K)亚基组成。这个额外的亚基比血清中的变体更大，可能反映了在CHO细胞合成过程中添加到重组SHBG的碳水化合物结构更复杂的程度。然而，其激素结合亲和力与CHO细胞产生的正常SHBG或血清中的SHBG相同。