两个N-linked聚糖需要维持胆汁盐泵出口的运输活动(ABCB11)在第二MDCK细胞。
文章的细节
-
引用
复制到剪贴板 -
Mochizuki K, Kagawa T, Numari,哈里斯MJ,伊藤J,渡边N,我T,阿里亚斯IM
两个N-linked聚糖需要维持胆汁盐泵出口的运输活动(ABCB11)在第二MDCK细胞。
杂志Gastrointest肝脏杂志。2007年3月,292 (3):G818-28。Epub 2006 11月2。
- PubMed ID
-
17082223 (在PubMed]
- 文摘
-
本研究的目的是确定的角色N-linked糖基化的蛋白质稳定性、细胞内贩卖,胆汁酸胆汁盐泵出口的运输活动(Bsep(磷酸腺苷盒式B11)]。老鼠Bsep与黄色荧光蛋白融合,和下面的突变体,Asn残留的假定的糖基化网站(Asn (109), Asn (116), Asn(122),和Asn(125))是按顺序Gln取代,由定点诱变:单一N109Q双N109Q + N116Q,三重N109Q + N116Q + N122Q,和四N109Q + N116Q + N122Q + N125Q。免疫印迹和糖苷酶裂解分析表明,每个站点是糖化。删除聚糖降低牛磺胆酸盐运输活动在第二偏振MDCK细胞决定。这降低了突变Bsep蛋白质的快速衰减;生物半衰期分别为3.76,3.65,3.24,1.35,和0.52 h在野生型,single-mutant, double-mutant,三倍体突变,分别和quadruple-mutant细胞。野生型和单一,double-mutant专门沿顶端膜蛋白分布,而三,quadruple-mutant保持细胞内的蛋白质。mg - 132但不是bafilomycin(1)延长半衰期,暗示Bsep的蛋白酶体降解的作用。确定是否一个特定的糖基化网站或多聚糖蛋白稳定性的关键,我们研究了蛋白质的表达的组合N-glycan-deficient突变体和观察到Bsep多糖与Bsep窝藏相比是相当不稳定的两个或两个以上的聚糖。总之,需要至少两个N-linked聚糖Bsep蛋白质稳定性、细胞内贩卖,在顶端膜和功能。