磷酸化和Ser突变在人类苯丙氨酸羟化酶(16)。动力学和结构效应。
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米兰达FF, Teigen K, Thorolfsson M, Svebak RM, Knappskog点,Flatmark T,马丁内斯
磷酸化和Ser突变在人类苯丙氨酸羟化酶(16)。动力学和结构效应。
生物化学杂志。2002年10月25日,277 (43):40937 - 43。Epub 2002年8月15日。
- PubMed ID
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12185072 (在PubMed]
- 文摘
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磷酸化的苯丙氨酸羟化酶(PAH)爵士(16)循环AMP-dependent蛋白激酶是一种翻译后修饰,提高其基底衬底l-Phe活动并促进其激活。到目前为止没有灵活的氨基端尾部结构信息(残留队),包括磷酸化位点。的分子基础得到进一步洞察磷酸化对催化效率的影响和酶稳定,分子建模进行了使用老鼠重组酶的晶体结构。最可能的构象和方向的氨基端尾因此获得表明Ser的磷酸化(16)诱发局部构象变化的结果一个磷酸基团之间的静电相互作用和参数(13)以及排斥,Glu(280)循环在入口处的活性部位裂隙结构。氨基尾巴残留的建模重新定位(满足(1)低浓缩铀(15)磷酸化在协议与观察到的构象变化和提高可访问性底物的活性部位,所表示的圆二色性光谱和全身的磷酸化的酶动力学数据和nonphosphorylated人类多环芳烃。进一步验证我们准备好的模型和特征突变体替代Ser(16)与带负电荷的残渣,发现S16E很大程度上模仿人类PAH的磷酸化的影响。与酸性磷酸化酶和突变体侧链而不是爵士(16)显示增加阻力对有限的胰蛋白酶的蛋白水解作用,圆二色性光谱表明,增加内容的α螺旋结构。协议的建模结构,形成一个参数(13)爵士(16)磷酸盐桥和构象变化的氨基端尾也解释了高稳定性对有限的胰蛋白酶的磷酸化酶的蛋白水解作用。获得的结果与突变R13A E381A进一步支持的模型提出了分子机制激活酶的磷酸化。