破译体内糖皮质激素受体的磷酸化“密码”。
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王铮，Frederick J, Garabedian MJ
破译体内糖皮质激素受体的磷酸化“密码”。
生物化学。2002 7月19日;277(29):26573-80。Epub 2002年5月8日。
- PubMed ID
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12000743 (查看PubMed］
- 摘要
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糖皮质激素受体(GR)通过激素依赖的方式在多个丝氨酸残基上磷酸化，但由于缺乏一种简单的检测体内受体磷酸化的方法，阻碍了对GR磷酸化功能的研究进展。我们已经产生了特异性识别人类GR中Ser(203)和Ser(211)磷酸化位点的抗体。在缺乏激素的情况下，GR的Ser(211)磷酸化水平较Ser(203)低。用GR激动剂地塞米松处理后，两个残基的磷酸化作用都增加了。通过一系列激动剂和拮抗剂，我们发现GR的转录活性与Ser(211)的磷酸化量相关，这表明Ser(211)磷酸化是体内激活GR的生物标志物。从机制上看，Ser(203)和Ser(211)在激素作用下的磷酸化动力学是不同的，其中Ser(211)的磷酸化相对于Ser(203)表现出更强大和持续的磷酸化作用。对GR免疫沉淀与磷酸化GR特异性抗体的分析表明，在没有激素的情况下，受体在Ser(203)处异质磷酸化，而在激素存在的情况下，受体的亚群在Ser(203)和Ser(211)处均被磷酸化。有趣的是，激素处理后的生化分馏研究表明，Ser(203)磷酸化的受体主要存在于细胞质中，而Ser(211)磷酸化的GR则存在于细胞核中。同样，通过免疫荧光，Ser(203)磷酸化的GR位于细胞的细胞质和核周区域，但不在核浆中，而在激素处理的细胞的核浆中明显可见强烈的磷酸化Ser(211)染色。我们的结果表明，不同磷酸化的受体位于独特的亚细胞区隔，可能调节受体功能的不同方面。