病理性人类GR突变体通过抑制GR转位到细胞核对野生型GR具有显性负作用:配体结合域对细胞内GR运输的重要性。
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Kino T, Stauber RH, Resau JH, Pavlakis GN, Chrousos GP
病理性人类GR突变体通过抑制GR转位到细胞核对野生型GR具有显性负作用:配体结合域对细胞内GR运输的重要性。
中华临床内分泌杂志2001 11月;86(11):5600-8。
- PubMed ID
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11701741 (查看PubMed］
- 摘要
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家族性或散发性糖皮质激素抵抗综合征的特征是高皮质醇血症，没有库欣综合征的临床特征。这种情况通常是由人类GR的突变引起的，GR是一种在细胞质和细胞核之间穿梭的配体激活的转录因子。一种病理性人突变受体，其中Ile在559位被Asn取代，配体结合微乎其微，转录极弱，对野生型GR的交易激活活性产生跨显性负性影响，在杂合状态下引起严重的糖皮质激素抗性。为了了解该突变体的反式显性机制，我们构建了几个绿色荧光蛋白(GFP)的n端GR融合嵌合体，并证明其交易活性与原始蛋白相似。GFP-human (h) GRalphaI559N嵌合体主要定位在细胞质中，只有高剂量或长时间的糖皮质激素治疗才触发完整的核导入，GFP-hGRalpha需要180分钟，而GFP-hGRalpha需要12分钟。此外，hGRalphaI559N抑制了野生型GFP-hGRalpha的核输入，提示其在野生型受体上的反式显性活性可能在核易位过程中发挥作用。由于GR的配体结合结构域(LBD)似乎在其核细胞质穿梭中起着重要作用，我们还检测了另外两个GR相关融合蛋白。天然hGR亚型β (GFP-hGRbeta)，包含一个独特的LBD，是不激活的，中度反显性的，瞬时定位，主要在细胞核中;糖皮质激素的添加没有改变其定位。同样，GFP-hGR514缺乏整个LBD，但无论糖皮质激素是否存在，它都即刻且主要定位于细胞核。 Using a cell fusion system we demonstrated that nuclear export of GFP-hGRalphaI559N (250 min) and GFP-hGRbeta (300 min) was drastically impaired compared with that of GFP-hGRalpha (50 min) and GFP-hGR514 (50 min), suggesting that an altered LBD may impede the exit of the GR from the nucleus. We conclude that the trans-dominant negative effect of the pathological mutant is exerted primarily at the translocation step, whereas that of the natural isoform beta is exerted at the level of transcription.