ATP结合位点的鉴定大肠杆菌DNA促旋酶。亲和标签赖氨酸- 103和赖氨酸- 110 B亚基的吡哆醛5 -diphospho-5腺苷。
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田村JK,据传M
ATP结合位点的鉴定大肠杆菌DNA促旋酶。亲和标签赖氨酸- 103和赖氨酸- 110 B亚基的吡哆醛5 -diphospho-5腺苷。
生物化学杂志。1990年12月5日,265 (34):21342 - 9。
- PubMed ID
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2174443 (在PubMed]
- 文摘
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我们已经标记大肠杆菌DNA的三磷酸腺苷结合位点与ATP亲和模拟旋转酶,[3 h]吡哆醛5‘-diphospho-5腺苷(PLP-AMP)。PLP-AMP强烈抑制atp酶和DNA成为超螺旋DNA促旋酶的活动,有50%抑制发生7.5 microM抑制剂。ATP和ADP与PLP-AMP争夺绑定和保护酶抑制。标签似乎进行的席夫碱4-formyl组之间的复杂pyridoxyl基PLP-AMP和蛋白质主要氨基,由于抑制和试剂标签是可逆的,除非NaBH4处理复杂。据估计,完全失活发生共价结合的2摩尔促旋酶的抑制剂/摩尔。ATP是不变的公里部分抑制酶样品,表明一种无效果的抑制。3 h-labeled肽生成残留93 - 131 B蛋白是孤立的v - 8蛋白酶消化。放射性的峰值对应于赖氨酸- 103和赖氨酸- 110被发现在埃德曼降解,表明这些氨基酸形成ATP结合位点的一部分。比较这个地区的氨基酸序列与其他II型拓扑异构酶的序列表示一个常见的ATP的可能位置绑定域名。