重组人肌尿酸酶的纯化及部分性质的生化表征。
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Walsh HA, Botting NP
重组人肌尿酸酶的纯化及部分性质的生化表征。
生物化学学报，2002;26(8):369 - 369。
- PubMed ID
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11985583 (PubMed视图］
- 摘要
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从含有犬尿氨酸酶基因杆状病毒感染的frugiperda (Spodoptera frugiperda, Sf9)细胞中纯化出重组人犬尿氨酸酶(L-kynurenine hydrolase, EC 3.7.1.3)，纯度达到60倍。纯化方案包括硫酸铵沉淀和几个色谱步骤，包括DEAE-Sepharose CL-6B、羟基磷灰石、强阴离子和阳离子分离。经SDS/PAGE鉴定酶的纯度，MALDI-TOF ms鉴定酶的分子量，测定的单体分子量为52.4 kDa，为预测分子量的99.99%。全酶的紫外吸收光谱在432 nm处有一个峰。酶的最适pH为8.25，酶的最适活性与缓冲液的离子强度密切相关。该酶对3-hydroxykynurenine (Km = 3.0 μ m +/- 0.10)具有高度特异性，可被L-kynurenine (Ki = 20 μ m)、D -kynurenine (Ki = 12 μ m)和合成底物类似物D, l -3,7-dihydroxydesaminokynurenine (Ki = 100 nm)抑制。该来源的犬尿酶活性/浓度分布在所有情况下均呈s型曲线。底物似乎有部分抑制作用，过量的吡哆醛5'-磷酸被发现有抑制作用。