动能酰化和糖基化网站的描述和识别人类gamma-glutamyltranspeptidase重组。
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卡斯顿圭R,哈利姆D,莫林M, Furtos, Lherbet C, Bonneil E,蒂博P·凯勒JW
动能酰化和糖基化网站的描述和识别人类gamma-glutamyltranspeptidase重组。
生物化学。2007年10月30日,46 (43):12253 - 62。Epub 2007 10月9。
- PubMed ID
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17924658 (在PubMed]
- 文摘
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Gamma-glutamyltranspeptidase (GGT)是一个heterodimeric对谷胱甘肽酶重要体内平衡控制。它也被牵连到许多生理疾病,包括帕金森病、凋亡抑制,和糖尿病。在第一步的乒乓机制结合谷胱甘肽,其体内基质,释放cysteinylglycine形成酰基酶的中间。这中间可以与水反应释放谷氨酸作为水解产品或一种氨基酸和二肽形成转肽作用的产品。机制的进一步详细研究这些反应是阻碍至少对一些ggt的低数量的可用多步纯化后蛋白质组织。在目前工作的基因克隆人类GGT pPICZalphaA向量,变成了毕赤酵母属pastoris表达作为68 kDa His-tagged蛋白质。优化的表达和分泌的酶1 L文化和后续净化的固定化金属亲和色谱法产生了1.6毫克的纯化酶的特定活动237 U /毫克。之间的转肽作用的反应动力学参数对谷胱甘肽和glycylglycine由质谱,给kcat 13.4 x 10(3)值最低为1和明显公里1.11毫米为glycylglycine谷胱甘肽和8.1毫米。谷胱甘肽的GGT-mediated水解也研究,提供一个kcat 53最低为1公里7.3 microM谷胱甘肽的价值。孵化机理抑制剂的酶,酶消化,和质谱分析提供了第一个明确的识别Thr381人类gamma-glutamyltranspeptidase的活性部位的亲核试剂,和确认的四个七N-linked糖基化的网站。 These structural and kinetic data are discussed with respect to a homology model generated to facilitate visualization.