含有单一二硫键的n端截断型重组人白细胞介素-6的结构、稳定性和生物学特性。
文章的细节
-
引用
复制到剪贴板 -
Breton J, La Fiura A, Bertolero F, Orsini G, Valsasina B, Ziliotto R, De Filippis V, Polverino De Laureto P, Fontana A
含有单一二硫键的n端截断型重组人白细胞介素-6的结构、稳定性和生物学特性。
生物化学杂志，1995年1月15日;227(1-2):573-81。
- PubMed ID
-
7851440 (在PubMed］
- 摘要
-
在大肠杆菌中产生了人类白细胞介素-6 185个残基链的突变种，其n端缺少22个残基，在第45和51位有一个Cys—>Ser取代。含有单二硫键桥的163残基蛋白des-(A1-S22)-[C45S, C51S]白细胞介素-6形成包涵体。突变体白细胞介素-6溶于6 M盐酸胍中，经氧化复性反应，经硫酸铵沉淀和疏水色谱纯化至均匀。通过电泳、等电聚焦和反相高效液相色谱法确定突变种的纯度，并通过完整蛋白及其几个蛋白水解片段的n端测序检查其结构的一致性。经电喷雾质谱分析，突变体白细胞介素-6的分子质量为18,695 +/- 2da，与计算值非常吻合。圆形二色光谱、荧光发射光谱和二阶导数紫外吸收光谱表明，突变体白细胞介素-6保持了重组野生型人白细胞介素-6的整体二级和三级结构以及稳定性特征。尿素诱导突变体白介素-6的展开，在远紫外区通过圆二色测量监测，是一个高度协同的过程，在5.5 M尿素处有一个变性中点。用尿素介导的突变体白细胞介素-6的可逆展开数据计算了20.9 +/- 0.4 kJ的值。在没有变性剂的情况下，用mol-1对蛋白质在25℃下的热力学稳定性进行了研究。突变体白细胞介素-6的生物活性在体外通过杂交瘤细胞增殖试验评估，在体内通过测量猴子的血栓形成。突变蛋白的剂量/反应效应与野生型蛋白相当甚至更高。 Overall the results of this study show that mutant interleukin-6 is a biologically active cytokine, which could find practical use as a therapeutic agent.