赖氨酸532在人拓扑异构酶催化机制中的作用。
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Interthal H, Quigley PM, Hol WG, Champoux JJ
赖氨酸532在人拓扑异构酶催化机制中的作用。
生物化学杂志2004年1月23日;279(4):2984-92。Epub 2003 10月31日。
- PubMed ID
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14594810 (查看PubMed］
- 摘要
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基于人类拓扑异构酶I与DNA结合的共晶体结构，Lys(532)在共价附着位点(-1位置)与强首选胸腺嘧啶残基进行了小凹槽接触。用精氨酸或丙氨酸替换Lys(532)对酶的序列偏好基本上没有影响，表明这种相互作用并不需要T在-1位置上的偏好。K532R突变酶的裂解活性和宗教活性均降低，但裂解活性的降低程度大于宗教活性。相反，对于K532A突变酶来说，由于其虔诚程度严重受损，以至于在质粒弛豫测定过程中，缺口中间物积累起来。与K532A突变酶的分裂平衡向分裂的转变一致，突变酶在酿酒酵母中的表达是细胞毒性的，因此这种突变酶模仿抗癌药物喜树碱的作用。使用含有5'-桥接硫代磷的寡核苷酸对突变酶进行裂解分析表明，赖氨酸(532)在裂解过程中作为一般酸，使剩下的5'-氧质子化。在催化过程中，与-1碱基的接触可能对活性位点提供位置刚性很重要。牛痘病毒拓扑异构酶和酪氨酸重组酶中相应的残基可能在催化中具有类似的关键作用。