人乳铁蛋白中组氨酸配体的突变:组氨酸-253- >蛋氨酸突变体的铁结合性质和晶体结构。
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Nicholson H, Anderson BF, Bland T, Shewry SC, Tweedie JW, Baker EN
人乳铁蛋白中组氨酸配体的突变:组氨酸-253- >蛋氨酸突变体的铁结合性质和晶体结构。
生物化学。1997 1月14日;36(2):341-6。
- PubMed ID
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9003186 (PubMed视图］
- 摘要
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保守的His配体对铁结合在转铁蛋白中的贡献已通过定点诱变和x射线晶体学分析解决。通过寡核苷酸定向诱变，他的人乳铁蛋白n端半分子LfN(残基1-333)的253位点被改变为Gly, Ala, Pro, Thr, Leu, Phe, Met, Tyr, Glu, Gln和Cys。这些蛋白质已在小仓鼠肾细胞中以高水平表达并纯化。结果表明，His配体对铁结合位点的稳定性至关重要。不管这些取代物是否是潜在的铁配体，所有的取代物都破坏了铁的结合。Cys、Glu和Tyr突变体在pH值低于6时失去铁，其他突变体在pH值低于7或更高时失去铁，而LfN突变体的pH值为5.0。失稳是空间效应和电子效应共同作用的结果。突变体H253M的晶体结构显示了电子效应的重要性，该突变体的有效分辨率为2.5 A，最终R因子为0.173。铁原子从六坐标变为五坐标;Met 253侧链不与铁结合，即使似乎没有空间势垒。 This is attributed to the poorer affinity of the thioether ligand for Fe(III) compared with imidazole nitrogen. The decreased stability of the iron binding is attributed solely to the loss of the His ligand as the protein conformation and interdomain interactions are unchanged.