糖基化在有机阴离子转运蛋白OAT1中的作用。
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田中坤，徐伟，周峰，尤刚
糖基化在有机阴离子转运蛋白OAT1中的作用。
中国生物化学杂志，2004年4月9日;279(15):14961-6。Epub 2004年1月28日。
- PubMed ID
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14749323 (PubMed视图]
- 摘要
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有机阴离子转运体(Organic阴离子transporters, OAT)在临床上重要的阴离子药物的体内配置中起着至关重要的作用，包括抗病毒药物、抗肿瘤药物、抗生素、降压药、消炎药等。我们之前报道过(Kuze, K.， Graves, P.， Leahy, A.， Wilson, P.， Stuhlmann, H.， and You, G. (1999) J. Biol。Chem. 274, 1519-1524)发现，天冬酰胺连接糖基化的抑制剂被卡霉素在表达小鼠有机阴离子转运体(mOAT1)的COS-7细胞中显著抑制有机阴离子转运，提示糖基化在mOAT1功能中起重要作用。在本研究中，我们通过将天冬酰胺突变为谷氨酰胺并评估HeLa细胞中的突变转运体，研究了破坏mOAT1及其人类对应物hOAT1中假定的糖基化位点的影响。我们发现mOAT1中假定的糖基化位点Asp-39没有糖基化，而hOAT1中的相应位点(Asp-39)被糖基化。破坏Asp-39导致mOAT1和hOAT1的转运活性完全丧失，而不影响它们的细胞表面表达，这表明功能的丧失不是因为Asp-39本身的去糖基化，而很可能是因为这种重要的氨基酸在底物结合中起关键作用。单次替换其他部位的天冬酰胺对转运活性没有影响，表明个别部位的糖基化对OAT功能不是必需的。相反，同时替换mOAT1和hOAT1中的所有天冬酰胺会损害转运蛋白到质膜的运输。综上所述，我们提供的证据表明:1)Asp-39在OAT1的底物识别中起着至关重要的作用;2)个别位点的糖基化对于OAT1的功能来说并不需要;3)糖基化在OAT1靶向到质膜上的过程中起着重要作用。这项研究是首次对OAT1糖基化的分子鉴定和表征，可能为有机阴离子转运蛋白家族的结构-功能关系提供重要的见解。