Nedd4调节CNrasGEF guanine-nucleotide交易所泛素化和稳定性因素。
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范教授N, Rotin D
Nedd4调节CNrasGEF guanine-nucleotide交易所泛素化和稳定性因素。
生物化学杂志。2001年12月14日,276 (50):46995 - 7003。Epub 2001年10月11日。
- PubMed ID
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11598133 (在PubMed]
- 文摘
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环核苷酸ras GEF (CNrasGEF)是以前guanine-nucleotide交换因素孤立在一个屏幕Nedd4-WW域相互作用蛋白(Pham, N。Cheglakov,我。科赫,c。,这位,c . L。莫兰,m F。,Rotin d(2000)咕咕叫。医学杂志。555 - 558)。它激活Ras cAMP-dependent方式和Rap-1独立的阵营。在这里,我们表明,CNrasGEF可能衬底的泛素蛋白连接酶Nedd4。CNrasGEF拥有两个PY图案的C末端负责绑定Nedd4体外。此外,Nedd4和CNrasGEF co-immunoprecipitate从293 t细胞表达异位CNrasGEF和内生Nedd4,这co-immunoprecipitation废除在PY motif-mutated CNrasGEF (CNrasGEFDelta2PY)。CNrasGEF ubiquitinated在细胞,这种泛素化增强在过度wt-Nedd4但在细胞overexpressing催化地抑制活性Nedd4 (Nedd4 (CS))或细胞表达CNrasGEFDelta2PY,哪些不能绑定Nedd4。此外,脉冲追踪实验证明的半衰期CNrasGEF减少5倍(从大约10到大约2 h)细胞中共同表达Nedd4 CNrasGEF但不是CNrasGEFDelta2PY (t(0.5)大约14 h)。CNrasGEF也稳定在细胞共同表达Nedd4 (CS)或lactacystin治疗后,表明这种蛋白质的蛋白酶体降解。 Deletion/mutation of the CDC25 domain to abrogate Ras (or Rap-1) binding leads to impaired ubiquitination of CNrasGEF, suggesting that such binding is critical for ubiquitination. Treatment of cells with the cAMP analogue 8-bromo-cAMP does not affect the ability of CNrasGEF to bind Nedd4 nor its level of ubiquitination, suggesting that Ras binding per se and not its activation is the critical step in triggering ubiquitination of CNrasGEF. These results suggest that CNrasGEF is a substrate for Nedd4, which regulates its ubiquitination and stability in cells.