二维电泳分析人类乳腺癌的蛋白质:蛋白质绑定到SH3域的映射的混合血统激酶MLK2。
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拉斯穆森RK,霁H, edd JS,莫里茨RL,里德通用电气,辛普森RJ Dorow DS
二维电泳分析人类乳腺癌的蛋白质:蛋白质绑定到SH3域的映射的混合血统激酶MLK2。
电泳。1997;3 - 4月18日(3 - 4):588 - 98。
- PubMed ID
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9150946 (在PubMed]
- 文摘
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成员MLK2混合血统激酶(灵魂)蛋白激酶家族,首次报道了Dorow et al。(欧元。j。1993、213、701 - 710年),由几个不同的结构域包括一个src homology-3 (SH3)领域,一个激酶催化领域,一个独特的领域包含两个亮氨酸拉链图案,多元序列和cdc42 / rac互动约束力的主题。这些域名已被证明在其他系统中被关联到一个特定类型的蛋白质相互作用在细胞信号转导的调控。研究MLK2在招聘特定底物的作用,我们构建了一个重组互补脱氧核糖核酸的氨基端100个氨基酸的编码MLK2 (MLK2N),包括SH3域(残留23 - 77),谷胱甘肽S-transferase融合。这种融合蛋白在大肠杆菌表达,纯化使用gluthathione-Sepharose亲和色谱法和采用亲和分离方法MLK2-SH3域绑定蛋白溶菌产物35 s-labelled MDA-MB231人类乳腺肿瘤细胞。绑定蛋白电泳分析显示两个low-abundance蛋白质分子量(先生)约31500,约34000,MLK2N蛋白质绑定一致。建立准确的Mt /等电点(pI)位点的MLK2-SH3域结合蛋白,大量丰富的蛋白质在一个二维电泳(2 de)掌握凝胶被确定为三角标记点。蛋白质被确定(i)直接埃德曼降解后electroblotting到聚乙二烯二氟化物薄膜(PVDF),(2)埃德曼降解产生的肽为胶液蛋白质水解和分馏快速(约12分钟)微内径列(2.1毫米ID)反相高效液相色谱法(HPLC),(3)质谱方法包括peptide-mass指纹和喷雾(ESI)质谱(MS) - MS利用毛细管柱色谱法(0.2 - -0.3毫米ID),或(iv)免疫印迹分析。利用这些信息,初步2 de蛋白质数据库对人类乳腺癌细胞系MDA-MB231,包括21识别蛋白质、建造和可以通过访问万维网(URL地址:http: www.ludwig.edu.au (/) / / www / jpsl / jpslhome.htm l)。